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Fruta oriental, mariposa, pessegueiro, tamu

Fruta oriental, mariposa, pessegueiro, tamu


Fruta oriental, mariposa, pessegueiro, tamu* (Goy) (* Zeiraphera rugulosa *) pode resultar em frutas com vigor reduzido e vida útil insuficiente. Vários estudos indicaram que os principais componentes voláteis da mariposa são os terpenóides, que consistem em aldeídos, álcoois, cetonas e ésteres. No entanto, os componentes da melada secretada pela mariposa são desconhecidos.

Nós relatamos anteriormente que * Feniletilisocianato * (PEI), um composto de pirrolidona, foi um dos principais componentes da melada desta mariposa ^ [@ CR1] ^. PEI tinha uma forte atividade antimicrobiana e tinha um nível mais baixo de citotoxicidade contra uma linha de células de mamíferos do que os compostos fenólicos ^ [@ CR1] ^. Também investigamos o efeito do componente PEI no desenvolvimento de larvas da mariposa oriental, * Z. rugulosa *. Como resultado, o PEI diminuiu significativamente a massa larval e a massa pupal.

No entanto, o PEI sozinho não reduziu a viabilidade das larvas da mariposa oriental. Isso sugere que os demais compostos, não avaliados neste estudo, estão envolvidos no desenvolvimento e na viabilidade das larvas da mariposa oriental.

Métodos {# Sec4}

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Materiais {# Sec5}

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### Cultivo de B. subtilis {# Sec6}

* Bacillus subtilis * subsp. * subtilis * KJ50 foi cultivado a 37 ° C em meio LB (SIGMA, Osaka, Japão) durante 14 h. As células foram colhidas por centrifugação a 9.000 × g por 5 min a 4 ° C, lavadas com solução de NaCl a 0,9% e, em seguida, com água destilada esterilizada. Os pellets celulares foram coletados por centrifugação, congelados em nitrogênio líquido e triturados em almofariz e pilão. As células foram liofilizadas, esmagadas em pó e armazenadas a -80 ° C.

### Determinação da concentração inibitória mínima (MIC) {# Sec7}

As bactérias liofilizadas (10 mg) foram suspensas em 200 μl de água destilada esterilizada, misturadas vigorosamente e incubadas por 10 min a 37 ° C. A turvação da suspensão bacteriana foi ajustada a um valor de padrões de 0,5 McFarland por mistura com o volume apropriado de água destilada esterilizada. Em seguida, a suspensão foi ajustada para uma concentração final de 100 µg / ml com água destilada esterilizada. A suspensão bacteriana (100 µl) foi dispensada em cada poço de uma microplaca de fundo plano de 96 poços (Corning, New York, EUA). A microplaca foi incubada a 37 ° C em uma incubadora de CO ~ 2 ~ por 24 h. O MIC foi definido como a menor concentração de composto que evitou a turvação no poço. Os valores MIC foram testados em triplicado.

### Determinação da concentração bactericida mínima (MBC) {# Sec8}

As culturas nos poços de ensaio MIC que não mostraram qualquer crescimento foram transferidas para uma placa de ágar LB fresca e cultivadas a 37 ° C por 24 h. O MBC foi definido como a concentração mais baixa do composto que impediu o crescimento bacteriano visível.

### * In Vitro * Teste de Suscetibilidade Antimicrobiana {# Sec9}

A susceptibilidade antimicrobiana dos compostos a um painel de microrganismos foi determinada pelo método de difusão em disco usando os seguintes meios comercialmente disponíveis: ágar Mueller-Hinton (MHA), ágar sangue, ágar MacConkey e ágar sangue de ovelha (Hangzhou Microbial Reagent Co. Ltd ., Hangzhou, China). O painel de microrganismos consistia em * Escherichia coli * (ATCC 35218), * Salmonella typhi * (ATCC 9285), * Proteus vulgaris * (ATCC 29243), * Staphylococcus aureus * (ATCC 25923), * Staphylococcus epidermidis * (ATCC 12228) , * Bacillus subtilis * (ATCC 6633), * Bacillus cereus * (ATCC 14579), * Enterobacter cloacae * (ATCC 23355), * Pseudomonas aeruginosa * (ATCC 27853), * Citrobacter freundii * (ATCC 8090), * Pseudomonas putida * (ATCC 51461), * Salmonella paratyphi * (ATCC 9250) e * Proteus vulgaris * (ATCC 19119). O painel de microrganismos foi inoculado na superfície de placas de ágar e cultivado a 37 ° C por 24-48 h. As concentrações inibitórias mínimas (MICs) dos compostos selecionados contra os microrganismos testados foram determinadas usando um método de microdiluição seguindo as diretrizes do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) ^ [@ CR24] ^. Resumidamente, os compostos foram dissolvidos em dimetilsulfóxido (DMSO, Sigma, St. Louis, MO, EUA) para gerar soluções estoque de 1 mM e, em seguida, diluídos em série para gerar soluções de trabalho de 128--0,125 μM em placas de 96 poços (100 μL /Nós vamos). Após incubação a 37 ° C por 24 h, os valores de MIC foram determinados como a menor concentração dos compostos testados que evitou a formação de uma zona de crescimento visível.

Ensaio de biofilme {# Sec14}

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A capacidade dos derivados representativos de 1-arilpirazol-5-il-piridin-2-il-amina para inibir a formação de biofilme foi avaliada usando o ensaio de violeta de cristal (CV) ^ [@ CR39] ^. Resumidamente, um volume de 100 μL de suspensão bacteriana contendo 1 × 10 ^ 7 ^ unidades formadoras de colônia (CFU) por mL foi inoculado nas placas de poliestireno de 96 poços e, em seguida, incubado a 37 ° C em condições estáticas. O meio de cultura foi atualizado no dia 3 e, a partir daí, a cada 3 dias, o meio de cultura foi removido e os demais biofilmes foram corados com 0,2% CV por 15 min em temperatura ambiente. Para quantificar a formação de biofilme, o CV ligado foi extraído com 50% de etanol, e a absorbância do corante foi medida em 570


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